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多肽合成常见的问题(一)

多肽是α-氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物,是蛋白质水解的中间产物。由两个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫做二肽,同理类推还有三肽、四肽、五肽等。通常由10~100个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫多肽。


常见问题

1.如果合成的多肽溶解性不好,多肽就有问题对吗?

答:多肽的溶解性及合适的溶剂是什么很难准确预测,若多肽难以溶解就表示多肽合成出现问题,显然这种想法不对。


2.多肽状态是如何储存的?

答:提供的多肽通常呈灰白色,粉末状,多肽粉末的颜色根据组成不同会存在差异,通常多肽短期可以在4摄氏度下避光保存,长期则需要在-2摄氏度下避光保存。


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3.如何溶解多肽?

答:多肽溶解相当复杂,通常合适的溶剂很难立刻确定。需要先取一点进行实验,千万不能在合适的溶剂确定之前就全部溶解。如下方法能够对选择合适的溶剂有所帮助。

(1)对多肽的电荷设定进行判定,设定碱性氨基酸Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2为+1,酸性氨基酸Asp(D),Glu(E)和C端COOH为-1,其他氨基酸的电荷为0,将电荷数计算出来。


(2)若净电荷数小于0,则多肽为酸性,用水溶解,若溶解性不高或者不能溶解,则将25ul氨水加入,再将500ul水加入稀释。


(3)若净电荷数等于于0,则多肽为中性,通常需要使用如乙腈,?#29366;?#25110;异丙醇,DMSO等有机溶?#20004;?#34892;溶解。


(4)若净电荷数大于0,则多肽为碱性,用水溶解,若溶解性不高或者不能溶解,则将10%以上醋酸加入,若多肽依然不能溶解,将少量TFA(25ul)加入,再将500ul水加入稀释。


4.多肽合成的基本原理是什么?

答:多肽合成化学的一个重大的突破,即为多肽固相合成法。能够连续进行合成过程,不需要对中间产物进行纯化为它的最大特点,并且奠定了多肽合成自动化的基础。目前为止,全自动多肽的合成基本上均是固相合成。以Fmoc化学合成为基础,首先通过共价键?#38382;?#36830;接所要合成的目标多肽的C-端氨基酸的羧基和一个不溶性的高分子树脂,再将这一氨基酸的氨基作为多肽合成的起点,和别的氨基酸已经活化的羧基作用构成肽键,将这一过程不断重复,就能够使多肽获得。由于多肽的氨基酸组成差异,多肽后有不一样处理方式和纯化方式。


5.做免疫用的多肽多长为合适?

答:通常在10-15个氨基酸左右,长一些会有更好的免疫效果,然而却会增加合成的成本。MAP多肽长度最好超过15aa,如此才会有比较好的效果。除此以外,若多肽的长度小于10aa,免疫效果则不理想。


6.免疫用多肽的纯度需要很高吗?

答:通常来说,免疫用Peptide,纯度达到70-85%就行了。


2019-07-24 17:47:10 浏?#26469;问?13次
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